miR-21 İfadesi Arttırılan HEPG2 Karaciğer Kanseri Hücresinde Oleandrinin Hücre Sağkalım ve Hücre Ölüm Mekanizmalarına Etkilerinin İncelenmesi

Abstract

Hepatosellüler karsinom (HCC) primer karaciğer kanserlerinin %82'sini oluşturmaktadır. Kansere bağlı ölümlerin üçüncü ana sebebidir. HCC'nin altında yatan ayrıntılı mekanizmanın ve patogenezinin araştırılması, yeni biyobelirteçlerin bulunup etkin öncül tedavi ve tanının keşfedilmesi, yeni terapötik ilaçların geliştirilmesi hasta ve potansiyel hastalar için önemlidir. miR-21, bir dizi kanserde yaygın olarak incelenen onkojenik miRNA'lardan biridir. Hücre proliferasyonu, göçü ve apoptoz ile ilgilidir ve kanserde invazyonu ve metastazı teşvik edebilir. Kanser tedavisinde ilgi gören Sodyum/potasyum (Na+/K+)-ATPase pompası (NKP) inhibitörlerinden Oleandrin'in anti-tümorigenik etkisi çeşitli kanser tiplerinde gösterilmiştir ve bu sebeple gelecekteki çalışmalar için umut vaat etmektedir. Bu sebeple bu tez çalışmasında, Oleandrin'in HCC hücresinde miR-21 ifadesi arttırılarak elde edilen (miR-21+) daha agresif hücrelerle stabil hücre hattı oluşturulmuş ve çeşitli kanser tiplerinde anti-tümorigenik etki gösteren Oleandrin'in HCC hücrelerine etkisini gözlemleyebilmek için iki boyutlu ve üç boyutlu ortamda transkriptomik ve proteomik çalışmalar gerçekleştirilmiştir. İki boyutlu ortamda Oleandrin'in HEPG2 ve miR-21+ hücreleri üzerindeki etkinliğini gözlemlemek için hücre canlılığı, proliferasyonu, koloni oluşturma potansiyeli, hücre siklusundaki etkisini gözlemleyebilmek için Annexin V/PI deneyi uygulanmıştır. Tümörün ilaca karşı verdiği cevabı taklit etme amacıyla oluşturduğumuz üç boyutlu hücre kültüründe yumuşak agar koloni oluşturma deneyi ve asılı damla deneyi gerçekleştirilmiştir. Çalışmamızda Oleandrin'in miR-21+ ve HEPG2 hücrelerinde hücre canlılığı ve koloni oluşturma potansiyelini azalttığı ve miR-21 ifadesini baskıladığı gösterilmiştir. Oleandrin'in hücre siklusunda G2/M fazında tutulu bıraktığı ve hücre içi sinyal yolaklarından PI3K/Akt/mTOR ve NF-κB'yi baskıladığı, apoptoz sinyal yolağını indüklediği incelenmiştir. Tez çalışmamızdan elde edilen sonuçlar doğrultusunda, Oleandrin'in Hepatosellüler karsinom hücre hattı HEPG2 ve miR-21 ifadesi arttılmış hücrelerde hücre canlılığını baskıladığı ve hücre ölümünü indüklediğini göstermiştir. Bu öncül çalışmanın sonuçları bağlı olarak Oleandrin'nin gelecekte in vivo çalışmalarının gerçekleştirilmesinin ardından Hepatosellüler Karsinom tedavisinde kullanılabilecek umut verici bir ajan olduğunu göstermiştir.